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真核表達載體構建實驗流程
真核表達載體構建實驗流程
更新時間:2025-02-18
訪問量: 1477
廠商性質: 生產廠家

提供商: 上海研謹生物
服務名稱: 真核表達載體構建實驗流程
規格: 實驗服務
價格: 3000元
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!

真核表達載體構建實驗流程產品概述:

真核表達載體構建實驗服務

 

 

 

.服務介紹

分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴 增特定DNA**片段的方法。常含有目的基因,用體外重組方法將它們插入克隆載體,形成重組克隆載體,通過轉化與轉導的方式,引入適合的寄主體內得到復制與擴增,然后再從篩選的寄主細胞內分離提純所需的克隆載體,可以得到插入DNA的許多拷貝,從而獲得目的基因的擴增。

 

二、實驗原理

外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組,這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中,將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種: T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在--起的功能, 而且T4噬菌體DNA連接酶還有一種大腸桿菌連接酶沒有的特性,即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低,一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應分為3步:首先,T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶- AMP復合物;然后,酶一AMP復臺物再結合到具有5磷酸基和3羥基切口的DNA上,使DNA腺苷化;后產生一個新的磷酸二酯鍵, 把切口封起來。

DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法,為了防止載體本身的自連,可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。

連接反應的溫度在37°C時有利于連接酶的活性但是在這個溫度下,粘性末端的氫鍵結合是不穩定的。因此人們找到了一個折中溫度,即12-16°C, 連接12-16h(過夜), 這樣既可大限度地發揮連接酶的活性,又兼顧到短暫配對結構的穩定。

 

三、實驗流程

1.目的DNA的擴增和純化;

2.連接反應;

3.電泳檢測連接產物。

 

四、客戶提供

樣本DNA,基因序列,試劑盒。

 

五、公司提供

構建好的載體,電泳膠圖,測序結果。

 

實驗代做服務:

 

免疫組化IHC染色實驗服務

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實驗服務

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯免疫(ELISA)技術服務

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術服務

 

染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

免疫細胞化學ICC實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務

PKC活性檢測實驗

非標定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

細胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務

 

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