PAS糖原染色-CBA流式多因子-明胶酶谱MMP-上海研谨生物科技有限公司

當(dāng)前位置:
首頁 > 技術(shù)文章 > SVEC4-10 小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線
技術(shù)支持Article
SVEC4-10 小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
點(diǎn)擊次數(shù):400 更新時(shí)間:2024-07-26

SVEC4-10 小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞

Mouse Lymph Node Endothelial Cells ,SVEC410

貨號(hào):YJ-m057(種屬鑒定)

價(jià)格: 1800.0

規(guī)格: 1*106

細(xì)胞介紹

SVEC4-10 是通過 SV40(菌株 4A)轉(zhuǎn)化腋窩淋巴結(jié)血管的內(nèi)皮細(xì)胞衍生的內(nèi)皮細(xì)胞系。在沒有特殊添加劑的情況下無限生長,并且分化良好,像正常內(nèi)皮細(xì)胞一樣對(duì)一些白細(xì)胞介素和細(xì)胞外基質(zhì)信號(hào)作出反應(yīng),以進(jìn)行管狀分化。

當(dāng)在合成基底膜上生長時(shí),SVEC4-10 會(huì)形成分支管狀網(wǎng)絡(luò)。SVEC4-10生長在類似于合成基底的膜上時(shí),它會(huì)形成管狀分支網(wǎng)絡(luò)。它們?cè)隗w外與小鼠淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合。細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞表面主要組織相容性復(fù)合體I類抗原H-2 k,易被抗SV40 H-2 k CTL克隆裂解。干擾素γ(ifn -γ)誘導(dǎo)MHC II類抗原在一個(gè)與正常內(nèi)皮細(xì)胞相同的時(shí)間過程中表達(dá)。細(xì)胞表達(dá)血管細(xì)胞粘附分子(VCAM),對(duì)sv40t抗原呈陽性染色。腫瘤壞死因子(TNF -)誘導(dǎo)SVEC4-10向梭形形態(tài)可逆轉(zhuǎn)變。

細(xì)胞特性

1) 來源:小鼠 輔助淋巴結(jié); 血管上皮

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣, SV40轉(zhuǎn)染 貼壁生長

3) 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。                    

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM(推薦YJ-0001)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

SVEC4-10 小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧


下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):



滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

主站蜘蛛池模板: 快速门厂家批发_PVC快速卷帘门_高速门_高速卷帘门-广州万盛门业 快干水泥|桥梁伸缩缝止水胶|伸缩缝装置生产厂家-广东广航交通科技有限公司 | 济南办公室装修-厂房装修-商铺装修-工装公司-山东鲁工装饰设计 | 猎头招聘_深圳猎头公司_知名猎头公司 | 广东之窗网 | 面粉仓_储酒罐_不锈钢储酒罐厂家-泰安鑫佳机械制造有限公司 | 北京租车公司_汽车/客车/班车/大巴车租赁_商务会议/展会用车/旅游大巴出租_北京桐顺创业租车公司 | 齿轮减速马达一体式_蜗轮蜗杆减速机配电机-德国BOSERL齿轮减速电动机生产厂家 | 压缩空气检测_气体_水质找上海京工-服务专业、价格合理 | 飞扬动力官网-广告公司管理软件,广告公司管理系统,喷绘写真条幅制作管理软件,广告公司ERP系统 | 餐饮加盟网_特色餐饮连锁加盟店-餐饮加盟官网 | 立刷【微电签pos机】-嘉联支付立刷运营中心 | 蒸汽热收缩机_蒸汽发生器_塑封机_包膜机_封切收缩机_热收缩包装机_真空机_全自动打包机_捆扎机_封箱机-东莞市中堡智能科技有限公司 | 济南货架定做_仓储货架生产厂_重型货架厂_仓库货架批发_济南启力仓储设备有限公司 | 青州开防盗门锁-配汽车芯片钥匙-保险箱钥匙-吉祥修锁店 | 电动高压冲洗车_价格-江苏速利达机车有限公司 | ICP备案查询_APP备案查询_小程序备案查询 - 备案巴巴 | 恒压供水控制柜|无负压|一体化泵站控制柜|PLC远程调试|MCGS触摸屏|自动控制方案-联致自控设备 | 隧道窑炉,隧道窑炉厂家-山东艾瑶国际贸易 | 北京征地律师,征地拆迁律师,专业拆迁律师,北京拆迁律师,征地纠纷律师,征地诉讼律师,征地拆迁补偿,拆迁律师 - 北京凯诺律师事务所 | 立式_复合式_壁挂式智能化电伴热洗眼器-上海达傲洗眼器生产厂家 理化生实验室设备,吊装实验室设备,顶装实验室设备,实验室成套设备厂家,校园功能室设备,智慧书法教室方案 - 东莞市惠森教学设备有限公司 | 液晶拼接屏厂家_拼接屏品牌_拼接屏价格_监控大屏—北京维康 | 广东恩亿梯电源有限公司【官网】_UPS不间断电源|EPS应急电源|模块化机房|电动汽车充电桩_UPS电源厂家(恩亿梯UPS电源,UPS不间断电源,不间断电源UPS) | 复合土工膜厂家|hdpe防渗土工膜|复合防渗土工布|玻璃纤维|双向塑料土工格栅-安徽路建新材料有限公司 | 冷油器,取样冷却器,热力除氧器-连云港振辉机械设备有限公司 | 广州办公室设计,办公室装修,写字楼设计,办公室装修公司_德科 | 手术室净化厂家_成都实验室装修公司_无尘车间施工单位_洁净室工程建设团队-四川华锐16年行业经验 | 建筑消防设施检测系统检测箱-电梯**检测仪器箱-北京宇成伟业科技有限责任公司 | 福州仿石漆加盟_福建仿石漆厂家-外墙仿石漆加盟推荐铁壁金钢(福建)新材料科技有限公司有保障 | 水环真空泵厂家,2bv真空泵,2be真空泵-淄博真空设备厂 | 除湿机|工业除湿机|抽湿器|大型地下室车间仓库吊顶防爆除湿机|抽湿烘干房|新风除湿机|调温/降温除湿机|恒温恒湿机|加湿机-杭州川田电器有限公司 | 南京租车,南京汽车租赁,南京包车,南京会议租车-南京七熹租车 | 中图网(原中国图书网):网上书店,尾货特色书店,30万种特价书低至2折! | 震动筛选机|震动分筛机|筛粉机|振筛机|振荡筛-振动筛分设备专业生产厂家高服机械 | 股指期货-期货开户-交易手续费佣金加1分-保证金低-期货公司排名靠前-万利信息开户 | 合肥废气治理设备_安徽除尘设备_工业废气处理设备厂家-盈凯环保 合肥防火门窗/隔断_合肥防火卷帘门厂家_安徽耐火窗_良万消防设备有限公司 | 防火阀、排烟防火阀、电动防火阀产品生产销售商-德州凯亿空调设备有限公司 | 合肥注册公司|合肥代办营业执照、2024注册公司流程 | 昆山新莱洁净应用材料股份有限公司-卫生级蝶阀,无菌取样阀,不锈钢隔膜阀,换向阀,离心泵 | 采暖炉_取暖炉_生物质颗粒锅炉_颗粒壁炉_厂家加盟批发_烟台蓝澳采暖设备有限公司 | 尊享蟹太太美味,大闸蟹礼卡|礼券|礼盒在线预订-蟹太太官网 | 全自动变压器变比组别测试仪-手持式直流电阻测试仪-上海来扬电气 |