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豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

通用名稱：豬瘟病毒抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Diagnostic Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody（CSFV Ab）,ELISA

【規格】

96T×2/盒

【用途】

用于檢測豬血清中豬瘟病毒抗體，適用于對豬場豬瘟疫苗免疫狀況的評價以及感染豬的血清學診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬瘟病毒重組抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的CSFV-Ab結合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+CSFV-Ab+酶標抗豬IgG抗體"復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與CSFV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后，經酶標儀檢測所得結果超過設定的臨界值時結果判為陽性，即表明免疫產生了抗體或有自然感染存在。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀，雙波長450/630nm濾光片

2．精確的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10ul，200ul）

7．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

3．樣本中含有常規用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，可以獲得最佳結果。.

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（即：5μl血清加195μl樣品稀釋液），混合均勻。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（即1ml濃縮洗滌液加19ml水），即可使用。注意：使用前要使結晶*溶解。

【檢驗方法】

1．加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。

2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內液體，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10秒，直接甩出，洗滌3次，最后一次洗滌后拍干板內液體。

4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

5．溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數。

9．讀數：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥1.0，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理:

 S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值（0.05以下的數值按0.05計算），PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值；

當樣本的S/P≥0. 25時判為陽性；樣品S/P值＜0.25時判為陰性；

若進行大量樣本檢測時，可使用試劑盒專業分析軟件進行分析數據結果，該軟件可登陸本公司網站下載。

【注意事項】

1．本試劑盒僅供研究使用。

2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不同批次的組分混合使用。

3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書。

4 使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（20～25℃），并搖動使沉淀溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用去離子水作20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水），混勻，稀釋好的洗滌液在2～8℃可以存放7-10日。

5．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

6．微孔板從冷藏環境中取出時應在室溫中平衡。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

7．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經常校對其準確性。

8．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個月。

【生產日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

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